항 AK3단클론 항체의 single chain fragment variable(ScFv)제작 및 생화학적 특성 연구

Abstract

단클론 항체는 항원에 대한 높은 특이성을 갖는다. 이러한 특성은 혈액이나 조직에 존재하는 특정 항원을 검출하기 위해 널리 이용되고 있다. 그러나 혈액 내에 존재하는 human anti mouse antibody (HAMA)와 같은 plasma protein 에 의한 단클론 항체와의 결합에 의해 특이성이 심하게 저하되는 현상이 나타난다. 최근 Fc 부분이 제거된 단클론 항체가 혈액내 비특이적 결합을 줄일 수있음이 ㅂ조고되고 있으며, 이러한 목적으로 phage display system을 이용한 항체공학이 Fc부분을 제거하기 위해 방법론적으로 활용되고 있다. 본 연구에서는 phage display system을 이용하여, 항 adenylate kinase isoenzyme 3(AK3) 단클론 항체 SJA3-86으로부터 single chain fragment variable gene(ScFv)을 cloning하였고, E.coli expression system을 통해 재조합 항체 ScF86을 발현시켰다. ScF86의 cDNA 염기배열로부터 유추한 CDR1, 2 및 3는 negative charge의 amino acid가 다수 포함되어 염기성 효소인 AK3를 전기적으로 효율적인 인식이 이루어짐을 확인하였고, parental antibody인 SJA3-86이 conformational epitope보다 denatured epitope을 효과적으로 인식하는 항원-항제 반응서으을 유지하고 있었다. 그러나 Fc 부분이 절단되고, 아미노산10개로 구성된 linker peptide가 도입된 결과 항원에 대한 Kd값은 1.1×10-9으로 원래의 약60%의 친화력을 단백공학에 의한 형태변화에도 불구하고 항원의 인식능력은 크게 변하지 않았다. 이러한 결과로 ScF86은 혈액내 비특이적 결합을 제거한 항체공학적 단클론 항체로서 임상적으로 유용하게 활용될 수 있을 것으로 사료된다.