CHO-DG44 세포의 현탁식 배양에서 세포응집에 영향을 끼치는 배지 성분과 배양 조건

Abstract

재조합 CHO 세포주에서 발생하는 세포응집은 세포와 배지사이의 영양분 및 산소전달을 저해하여 생존율을 낮추고 단백질 생산량을 감소시키는 문제점을 발생시킨다. 강화 DMEM/F12 배지에 응집이 심한 CHO-DG44 세포주를 배양하였을 때, 칼슘이온 농도를 낮추는 것만으로 세포응집을 감소시킬 수 없었으나 5∼30 mg/l^(-1)의 CaCl₂ 농도에 대하여 배지 중 dextran sulfate를 25 mg/l^(-1) 이상 첨가한 조건에서 일정한 세포 평균직경으로 배양 할 수 있었다. 칼슘이온의 농도를 낮출 수 없는 상용배지를 이용하여 배양하는 경우 플라스크의 교반속도를 80 rpm에서 200 rpm으로 증가시켰을 때 세포의 응집이 감소하면서 세포농도와 항체생산량이 증가하였다. 세포 현탁 배양에 있어서 세포 응집을 방지하는 데 있어서 Ca^(2+) 이온의 농도를 낮추는 것 뿐 만이 아니라 dextran sulfate 첨가를 병행하는 것이 세포응집을 방지하는데 효과가 있었으며 교반속도를 증가시키면서 dextran sulfate를 첨가하는 경우 세포응집을 감소시키는 시너지 효과가 있어 배양 7일째의 세포 평균직경이 추가적으로 16±9 % 감소함은 물론 최대 세포농도와 항체생산량도 각각 25±9 %, 32±11 % 증가하였다.; Cell aggregation in recombinant CHO cell lines inhibits the mass transfer between the cell and media, decreasing the viability and protein production. In a modified DMEM/F12 with calcium ions and dextran sulfate controled, a CHO-DG44 cell line with severe aggregation was cultivated, when concentrations of calcium chloride were 5, 10, 30 mg l^(-1) and dextran sulfate above 25 mg l^(-1), the mean cell diameter was fixed at a uniform value during cultivation. Dextran sulfate was effective when reducing calcium ion concentrations were insufficient preventing cell aggregations. In commercial mediums where reducing calcium ion concentrations is unattainable, increasing the agitation of the flask from 80 rpm to 200 rpm increased the cell growth and antibody production as cell aggregation decreased. Synergetic effects decreasing cell aggregation was observed when orbital shaking was increase with dextran sulfate addition, decreasing the mean diameter 7-24 %, increasing the maximum cell density 16-33 % and antibody production 21-42 %.