무혈청 배지에서 transferrin 대체 성분 첨가에 따른 CHO-DG44 세포별 배양 특성

Abstract

본 연구에서는 강화된 DMEM/F12배지에서 CHO-DG44 host cell 과 rCHO-DG44 cell line을 이용하여 TF 대체 성분인 FC, FAC, FS, FS+CS 성분들의 세포별 성장 특성을 확인하였다. Myeloma 세포에서 TF 무첨가 상태에서 FC와 FAC 대체효과는 확인 되었으나, CHO-DG44 세포에서의 효과적인 TF 대체물질 평가는 Host cell line에서 TF 대체 성분 평가 결과 FC 30, 50mg/l 조건에서 cells/ml로 가장 높은 최대세포농도를 확인하였으나 TF 대체 성분들 간 비슷한 cell growth rate를 보였다. 다만 FS 단독 첨가 시 최대세포 농도 도달 후 급격한 세포 사멸이 확인 되었으며, FS와 CS의 혼합 첨가 평가를 통해 CS가 iron을 효과적으로 세포에 공급할 수 있음을 확인할 수 있었다. Recombinant cell line에서 TF 대체 성분 평가 결과 평가 조건 간 차이 없이 유사한 cell growth rate를 보였다. Host cell line과는 달리 FS 단독 첨가 시에도 최대세포농도 도달 이후 급격한 세포 사멸은 확인 되지 않았다. 하지만 FS 100mg/l 과량 첨가 후 CS 혼합 비율을 조절하여 평가 시에 FS 100mg/l와 CS 100mg/l 혼합 첨가 경우 130mg/l의 TF 대체 성분 중 가장 높은 항체 생산성을 확인할 수 있었으며 FS 과량 첨가해 주어도 동일 비율로 CS 혼합 첨가 시에 iron이 세포에 효과 적으로 전달되어 항체 생산성에 도움이 됨을 알 수 있었다. Myeloma 세포에서는 FC와 FAC성분이 효과적으로 TF 성분을 대체할 수 있는 것으로 알려져 있다.(Mattew et al., 2007) 본 연구에서는 CHO-DG44 세포에서 동물 유래 성분인 TF를 대체하여 효과적으로 iron을 세포에 위해서는 배지에 고농도의 FS와 iron chelator인 CS를 1:1 비율로 혼합 첨가하여 배양하는 것이 cell growth와 항체생산성 증진에 도움이 된다는 것을 알 수 있었다.