무단백 배지 내 지용성 성분의 첨가가 CHO-DG44 세포성장에 미치는 영향

Abstract

Chinese hamster ovary DG44 (CHO-DG44) 세포는 높은 생산성과 안정성을 가지고 있어 재조합 단백질의 생산에 많이 사용되고 있다. 보통 혈청배지에서 부착식 배양으로 자라는 CHO-DG44 세포주는 혈청의 안전성 문제로 현재 무혈청배지로 대체되고 있다. 특히 최근에는 무혈청 배지에서 동물성 유래 성분를 제거한 무단백배지의 개발이 이루어지고 있다. 본 연구에서는 무단백 배지에 재조합 CHO-DG44 세포를 배양시, 지용성 성분를 첨가하여 기존의 동물성 유래 성분이 함유되어 있는 Lipid mixture 를 대체 하는 실험을 실시했다. 자체개발 무단백 배지인 Han yang protein free media (HY-PFM)에 동물성 유래 성분이 포함된 lipid mixture를 첨가하지 않고 동물세포에서는 합성이 되지 않는 필수지방산인 linoleic acid와 lipoic acid를 강화 첨가해 세포를 배양하고 계대 배양을 실시했다. 그러나 계대가 진행 될수록 세포의 성장속도가 현저히 감소되는 문제점을 확인 했다. 원인으로 배지 제조시 여과 제균 과정에서 지용성 성분인 linoleic acid와 lipoic acid 성분이 필터를 통과하지 못해 배지내에 이들 성분의 농도가 낮을 것으로 예상되었다. 이를 개선하기 위해 비이온 계면활성제인 TWEEN?? 80(Polyoxyethylenesorbitan monooleate)을 linoleic acid와 lipoic acid 혼합 후 배지에 첨가했다. 먼저 비이온 계면활성제인 TWEEN?? 80은 고농도로 배지에 첨가 할 경우 세포의 막을 파괴하기 때문에 배지내에 첨가 할 수 있는 최대 농도를 확인 하는 실험을 실시했다. 그 결과 TWEEN?? 80은 25mg～200mg/L 농도로 첨가시 세포의 성장에 영향을 주지 않으면서 동일한 성장농도를 확인 했다. TWEEN?? 80 농도 50mg/L에서 linoleic acid와 lipoic acid에서 배양 실험을 실시했다. 그 결과 4계대 배양 후에도 lipid mixture를 첨가한 control 조건대비 85%의 항체 생산성을 관찰했다.