류마티스성 질환의 선별검사인 AIT 검사 방법의 재정립

Abstract

연구 배경 : 대식세포주(IT-1)를 기질로 이용한 자가면역표적 (autoimmune target; AIT) 검사는 류마티스관절염과 질병 연관관계를 갖는 새로운 자가항체인 항-MTOC 및 항-GiM의 발견으로 HEp-2 세포를 이용한 기존 항핵항체(antinuclear antibody; ANA) 검사보다 임상적 적용의 폭이 넓다. 최근 연구에 의하면 일부 전신성 류마티스성 질환에서 발현이전의 무증상 단계부터 자가항체가 출현하고 있음을 보고하고 있다. 따라서 기존 ANA 검사의 경우 위양성 및 저역가 자가항체 양성의 무증상 정상인을 배제하기 위해 선별시험역가를 1:80을 권장하고 있으나 오히려 선별시험역가를 낮추어 저역가의 자가항체도 적극적으로 검출하는 것이 더 타당하리라 생각된다. 이에 저자는 AIT 검사의 선별시험역가를 낮추고 반응시간 및 반응온도를 달리하여 최적 검사조건을 찾아보고자 하였다. 재료 및 방법 : 고역가 및 저역가 표준혈청(ImmunoThink, Seoul, Korea)을 재료로 하였고, IT-1세포를 기질로 제작, 상품화된 슬라이드(IT-AIT; ImmunoThink, Seoul, Korea)를 사용하였다. 표준혈청을 저역가는 1:5에서 1:40까지 고역가는 1:5에서 1:10240까지 배수 희석한 후 각 희석배수에서 선별시험을 간접면역형광법으로 시행하였다. 반응온도와 반응시간의 조건을 25℃/30분, 25℃/45분, 37℃/30분 및 37℃/45분으로 각각 달리하여 시행하였다. 연구 결과 : 고역가 표준혈청의 경우 각각의 반응온도 및 반응시간에서 역가의 차이는 일희석배수 이내이었다. 1:20 이하의 희석배수에서 25℃의 반응온도 조건의 경우 형광패턴별 특징적인 형태의 prozone 현상 또는 세포질의 비특이적인 형광양상이 관찰되었다. 저역가 표준혈청의 경우 반응온도 및 시간에 관계없이 희석배수를 낮춤에 따라 자가항체 양성율이 증가하였다. 형광패턴별로 speckled pattern은 선별시험 역가가 낮아짐에 따라 형광강도가 증가하는 반면, perinuclear skeleton pattern은 1:5, 1:10의 희석배수에서 관찰되는 세포질의 비특이적인 형광양상으로 인해 정확한 형광패턴을 구분할 수 없었다. 결론 : 류마티스성 질환의 선별을 위한 AIT 검사의 최적조건은 희석배수 1:20, 반응온도 37℃, 반응시간 45분이었다.; Background : As with the discovery of new autoantibody including anti-MTOC and anti-GiM that are pathologically related to rheumatoid arthritis, autoimmune target test (AIT) using macrophage cell line (IT-1) as a substrate has a wider range of clinical applicability compared to the conventional antinuclear antibody test using HEp-2 cell. According to recent studies, autoantibody is detected in pre-manifestational non-symptomatic stage of systemic rheumatic diseases. In general, in order to rule out false positives as well as low titer autoantibody positive asymptomatic normal individuals in conventional antinuclear antibody test, screen titer of 1:80 is recommended. However, it would be considered more logical to lower the screen titer to also detect low titer autoantibody. The author sought to find the optimal test condition of autoimmune target test by lowering the screen titer under different incubation time and temperature. Materials and methods : High and low titer control sera (ImmunoThink, Seoul, Korea) was used with commercialized slide (IT-AIT; ImmunoThink, Seoul, Korea) prepared with IT-1 cell as the substrate. High titer control sera were serially diluted from 1:5 to 1:1024 and were tested at each dilution. Low titer control sera were tested at 4 dilutions; at dilutions of 1:5, 1:10, 1:20, 1:40, screening test was performed using indirect immunofluorescence method. Each different incubation time and temperature was applied at 25℃/30min, 25℃/45 min, 37℃/30 min, and 37℃/45 min. Results : For high titer control sera, the titer was within 1 multiple of dilution at each incubation time and temperature condition. At dilution of under 1:20 at 25℃, fluorescence pattern specific prozone phenomenon or nonspecific fluorescence stain in cytoplasm was observed. For low titer control sera, the positivity rate of autoantibody is increased as screen titer was lowered regardless of incubation time and incubation temperature. In terms of fluorescence pattern, speckled pattern showed increase of fluorescence intensity as screen titer was lowered while perinuclear skeleton pattern could not be distinguished of its fluorescence pattern due to nonspecific fluorescence staining in cytoplasm observed at 1:5 and 1:10 screen titer. Conclusion : The optimal test condition of AIT test for screening of rheumatic diseases was 1:20 screen titer at 37℃ incubation temperature and 45 minute of incubation time.