F(ab)’2 항체 절편화 공정개발과 항원 결정기 진단으로의 응용

Abstract

항원-항체 결합 반응 시 nonspecific binding을 줄일 수 있고 면역성을 줄일 수 있고 Fc에 의한 effector 기능을 피하기 위해 항체분자 전체 보다는 F(ab)’2를 이용하고 있다. 본 연구에서는 FabRICATOR?瑛? 이용하였다. IdeS 또는 Streptococcal Mac-1 이란 명칭을 가지고 있는 FabRICATOR?瑛? Streptococcus pyogenes 사람 병원균으로부터 얻어졌다. 다른 절단 효소(예: pepsin, papain)와는 다르게 IgG의 heavy chain의 hinge 아래 부분을 특이적으로 절단하는 cysteine proteinase이다. 단클론항체(anti-HBsAg)과 다클론 항체(rabbit IgG) 모두 같은 패턴으로 절단되었다. 또한 poly histidine tag를 가지고 있는 FabRICATOR가 nickel bead와 그리고 Fc가 Protein A와 효과적으로 결합하여 F(ab)'2 및 Fc와 FabRICATOR 효소를 효율적으로 분리할 수 있었다. FabRICATOR은 nickel bead에 부착된 상태에서 3회 까지는 재사용이 가능하였다. 얻어진 F(ab)’2의 HBsAg와의 결합 친화력을 전체항체인 anti-HBsAg와 비교하기 위하여 SPR 분석을 수행하였다. SPR biosensor를 통하여 anti-rHBsAg F(ab)’2와 anti-HBsAg의 HBsAg 결합반응의 Kd이 각각 3.83 x 10-12 M과 4.61 x 10-12 M으로 확인되어 F(ab)'2의 결합친화력이 전체항체 분자의 결합력과 거의 동일한 것으로 나타났다. 표면이 carboxyl기로 코팅된 자성입자에 anti-rHBsAg F(ab)’2와 anti-rHBsAg를 고정 시킨 후 HBsAg와의 결합력을 확인한 결과 각각 4.32 nM과 4.24 nM으로 확인되어 자성입자에 고정화된 anti-rHBsAg F(ab)’2 의 결합력이 anti-HBsAg의 결합친화력과 동일한 것으로 나타났다.