MDA231 유방암 세포에서 p27이 세포 이동에 미치는 영향에 관한 연구

Abstract

p27은 Kip family에 속하는 cyclin 의존적 kinase (Cdk)의 억제제로서 과발현 되었을 경우 G1기의 세포 주기 정체 또는 apoptosis를 유발한다. 세포 주기를 조절하는 역할 이외에 p27은 세포질에 존재하게 될 때는 세포의 운동성에도 관여한다고 보고되어있다. MDA231 유방암 세포의 이동성에 미치는 p27의 효과를 관찰하기 위하여 RNA 간섭 방법을 사용하여 p27의 발현을 억제하였다. 인간의 p27 염기 서열에 의존하여 제작한 p27 shRNA를 가지고 있는 레트로바이러스를 MDA231 세포에 감염시켰다. 그 결과 p27의 단백질 양이 효과적으로 감소하는 것으로 나타났다. 반면 생쥐의 p27 염기서열에 의존하여 제작한 p27 shRNA 레트로바이러스의 감염은 MDA231 세포의 p27 단백질 양에 변화를 일으키지 못하였다. 인간 p27 shRNA를 발현하는 MDA231 세포 (MDA231-hp27shRNA)는 생쥐 p27 shRNA를 발현하는 MDA231 세포 (MDA231-mp27shRNA)에 비하여 성장 속도가 저해되었다. 반면 wound healing assay를 통하여 세포의 이동성을 조사해본 결과 MDA231-hp27shRNA세포가 MDA231-mp27shRNA에 비하여 운동성이 저해되는 것으로 관찰되었다. MDA231세포에서 면역염색방법을 사용하여 p27의 세포내 위치를 확인하여 본 결과 MDA231 세포의 p27은 주로 세포핵 내에서 관찰되었다. 이 결과는 세포핵안의 p27도 세포질에 존재하는 p27처럼 암세포의 이동성에 관여한다는 것을 의미한다.; p27 is a member of the Kip family cyclin-dependent kinase inhibitors and its overexpression results in cell cycle arrest at G1 and/or apoptosis. In addition to its role as a regulator of cell cycle progression, p27 also has been known to participate in cell motility, especially when it is mislocalized in the cytosol. In an attemp to investigate the role of p27 in the motility of MDA 231 breast cancer cells, p27 knockdown was performed in MDA231 cells by RNA inteference. Infection of MDA231 cells with retroviruses harboring p27 shRNA designed from human p27 cDNA sequence resulted in efficient inhibition of p27 expression while p27 sh RNA designed from mouse p27 cDNA sequence did not affect p27 expression in MDA231 cells. MDA231 cells infected with human p27 shRNA (MDA231-hp27shRNA) showed delayed proliferation as compared to control MDA231 cells and MDA231 cells infected with mouse p27 shRNA (MDA231-mp27shRNA). However, cell migration as monitored by would healing assays revealed that MDA231-hpshRNA cells migration was markedly impaired as compared to MDA231-mpshRNA cells. Immunostaining of p27 in MDA231 cells showed that p27 predominantly localized in nuclei. These results suggest that nuclear p27 can also promote cancer cell motility as well as cytosolic p27.