병아리 와우 유모세포에서 Calmodulin-like Calcium Binding Proteins 의 발현

Abstract

목 적 : 전압의존성 칼슘채널은 세포내 calmodulin과의 상호작용으로 칼슘의존성 비활성화가 빠르게 일어난다. 그러나 와우 유모세포에서는 이 비활성화가 타 조직 세포에 비해 매우 느리게 일어난다. 이를 조절하는 기전에 calmodulin-like calcium binding proteins (CaBPs)의 작용 가능성을 알아보고자, 조류 와우를 대상으로 CaBPs의 발현여부를 조사하였다. 방 법 : 부화 후 일주일 이내의 병아리를 실험재료로 이용하였다. 측두골에서 채취한 와우로부터 mRNA를 추출한 후 역전사하여 cDNA를 제작하였다. Mouse genome을 검색하여 2종류의 CaBPs를 찾아 이들에 대한 primer를 제작하여 PCR을 시행하였고, PCR 반응물을 전기영동 후 젤에서 분리하여 cloning한 후 sequencing을 하여 확인하였다. 면역조직화학염색을 위해 병아리 측두골을 절제한 뒤 고정, 탈골화, 동결억제를 한 후 10 ㎛의 절편을 제작하였다. 일차항원으로 rabbit anti-CaBP 1, anti-CaBP 4, goat anti-choline acetyl transfersase (ChAT)로 반응시키고, 이차항원은 ALEXA 488이나 ALEXA 555를 이용하여 반응시킨 후 형광 현미경을 이용하여 관찰하였다. 결 과 : 1. 역전사중합효소연쇄반응(RT-PCR); CaBP 1과 4에 대한 역전사중합효소연쇄반응에서 두 가지 모두 병아리 와우에서 발현되었다. 와우 전체 조직에서 유모세포만을 분리하여 시행한 동일한 실험에서도 모두 발현되어 이들 CaBPs가 유모세포에 존재함을 확인하였다. 2. 면역조직화학염색; CaBP 1에 대한 항체가 유모세포의 섬모다발과 소피판(cuticular plate) 부위에 발현되었고, 천개막(tectorial membrane) 등의 주변세포에서도 발현되었다. CaBP 4에 대한 항체는 거의 유모세포에 국한되어 발현되었고, 소피판과 세포질에 집중적으로 분포하였다. 항 ChAT는 유모세포의 원심성 신경 말단에서 발현되었다. 결 론 : 병아리 와우에서 CaBPs들이 발현되었고, 특히 CaBP 4가 유모세포에 국한되어 존재함을 확인하였다. 이 CaBPs가 칼슘의존성 비 활성화를 조절하는 요소가 될 수 있을 것으로 생각된다.