LC-MS/MS에 의한 원산지가 다른 프로폴리스 추출물의 유효성분 분석

Abstract

선행된 프로폴리스 성분분석 자료에 따르면 연구자에 따라 시료 추출방법, 분석조건이 달라 원산지별로 특이적으로 함유한 프로폴리스 유효성분 함량을 객관적으로 비교 분석하기 어려웠다. 프로폴리스의 생리활성성분인 phenol류의 caffeic acid, ρ-coumaric acid, CAPE(Caffeic acid phenethyl ester), cinnamic acid, galllic acid, salicylic acid와 flavonoid류인 chrysin, kaempferol, pinocembrin, quercetin, rutin을 포함하여 총 11가지 표준성분을 설정 후 3가지 원산지의 프로폴리스를 같은 조건에서 추출된 에탄올 추출물 및 수용성 프로폴리스 추출물을 같은 분석조건의 LC/MS-MS를 이용하여 원산지에 따른 화학적 특성을 살펴보고, 각기 유효성분을 정량분석을 목적으로 한다. 추출물 제조는 에탄올 추출방법과 수용성 프로폴리스 추출물 제조공법으로 식품의약품안전처 건강기능식품의 기준 및 규격에 따라 총 플라보노이드 함량 10 mg/g 이상에 맞춘 후 실험에 사용하였으며 프로폴리스 원산지는 브라질산의 그린 프로폴리스, 호주산과 한국산의 브라운 프로폴리스를 시료로 사용하여 LC/MS-MS를 통해 성분분석을 하였다. 프로폴리스 유효성분의 LC-MS/MS 분석방법을 검증한 결과, 유효성분들이 명확하게 검출되어 선택성을 만족했으며 직선성의 범위는1∼1,000 μg/mL, 검량선의 결정계수(r2)는 0.99 이상의 우수한 직선성을 보여줬으며 정량한계는 0.09∼4.26 ng/mL였으며, 검출한계는 0.03∼1.42 ng/mL로 나타났다. 또한, 정확성은 일내의 경우 89.3%∼109.1%이며, 일간의 경우 86.9%∼108.8% 값으로 나타내어 정밀성이 20% 이하이며 정확성이 80∼120%인 조건을 만족하였다. 에탄올 추출물의 유효성분 분석 결과는 한국산은 pinocembrin (5,438.14 μg/g), 호주산은 chrysin (1,869.41 μg/g), 그리고 브라질산은 ρ-coumaric acid (2,771.37μg/g) 함량이 가장 높았으며 수용성 프로폴리스의 경우 한국산은 chrysin (2,452.66 μg/g), 호주산은 chrysin (2816.25 μg/g), 그리고 브라질산은 ρ-coumaric acid (4,060.50 μg/g) 함량이 가장 높았다. 추출 용매 및 방법에 따라 유효성분의 차이는 나타났지만, 종합적으로 유효성분 분석 결과를 통해 호주산, 한국산의 chrysin, pinocembrin 등과 같은 flavonoid류, 브라질산은 ρ-coumaric acid와 같은 phenol류가 특이적으로 높은 것을 확인하였다. 본 연구에서는 같은 조건에서 분석하고 추출한 프로폴리스의 11가지의 유효성분을 정량 분석하여 원산지별로 나타내는 각 성분의 함량을 비교하였다. 원산지별로 분석한 에탄올, 수용성 프로폴리스 추출물의 11가지 생리활성성분의 함량 자료를 통해 원산지별로 특이적으로 기인할 수 있는 효능을 확인하였으며, 원산지가 다른 프로폴리스를 혼합함으로써 다양한 유효성분을 섭취할 수 있도록 하여 강화된 효능을 기대할 수 있을 것이다. 이처럼, 앞으로 프로폴리스 국제 표준화 설정 및 건강기능식품과 천연물 기반의 신약 개발 시 프로폴리스 원산지에 따라 기대할 수 있는 효능에 대한 기초 자료로 유용하게 활용될 것이다.