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Surface Plasmon Resonance 센서를 이용한 고정화 단백질의 풀림과 재접힘 과정의 모니터링

Title
Surface Plasmon Resonance 센서를 이용한 고정화 단백질의 풀림과 재접힘 과정의 모니터링
Other Titles
Monitoring of Unfolding and Refolding of Immobilized Proteins Using Surface Plasmon Resonance Sensor
Author
이은규
Keywords
solid-phase refolding; SPR; refolding monitoring; urokinase; anti-GST; myoglobin
Issue Date
2002-09
Publisher
한국생물공학회
Citation
KSBB Journal, v. 17, no. 5, page. 328-334
Abstract
The process monitoring method for the traditional solution-phase refolding could not be directly applied to the solid-phase refolding of immobilized proteins. In this study, we studied the structural change of the covalently immobilized proteins on the gold film of a SPR (surface plasmon resonance) sensor chip by detecting the reflective index change. After confirming the positive relationship between the resonance value and the protein's degree of unfolding, we tested the effect of denaturant concentration such as urea and guanidine-HCl on the protein structure. To investigate the effect of disulfide bonds on the refolded structure, 2 mM dithiothreitol was added during the in-vitro refolding experiment of urokinase (12 disulfides) and disulfide-free myoglobin. Unlike the myoglobin, the RU (resonance unit) value of the urokinase was not fully recovered to the original value, which suggested that the unrecovered RU value represent the miss-shuffled structure. We proposed the unique method to monitor the unfolding/refolding of immobilized proteins by using the simple SPR sensor. This method can be applied to identify the optimal condition for the solid-phase refolding process of immobilized proteins. 고체 상에 고정화된 단백질에 대한 풀림/재접힘 공정을 SPR을 이용하여 정량적으로 모니터링 할 수 있는 방법을 제시하였다. 이러한 방법은 고정화된 단백질의 재접힘 공정의 모니터링을 위한 현재까지 유일한 방법이며 생물학적 활성과 의 비교를 통해 논리적인 근거를 제시하였다. 그러나 이러한 센서칩 상에서 단백질의 풀림과 재접힘을 모니터링 하는 실험에서 풀림 정도에 따른 단백질의 생물학적 활성을 측정한 다는 것이 대부분의 단백질에서는 어려운 문제가 있다. 앞으로 생물학적 활성과 연관된 여러 대상 단백질에서 추가적인 연구가 필요하다. 그러나 본 연구 방법은 빠른 시간에 적은 시료만으로 실험을 수행할 수 있기 때문에 고체상 재접힘(solid-phase refolding) 공정의 최적 조건을 찾는 방법으로 사용할 수 있을 것으로 기대된다.
URI
https://www.earticle.net/Article/A101162https://repository.hanyang.ac.kr/handle/20.500.11754/157387
ISSN
1225-7117
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