응집이 심한 CHO-DG44 세포의 무혈청 배지 현탁 배양

Abstract

본 연구에 사용된 CHO-DG44 세포의 경우 특정한 무혈청 배지에서만 성장하고 다른 무혈청 배지에서는 응집이 심하게 일어나 성장하지 않는 특성을 보여 배양이 불가능하였다. 따라서 본 연구의 목적은 이 CHO-DG44 세포를 응집이 일어나는 무혈청 배지에서도 응집을 방지할 수 있는 dextran sulfate을 추가하여 세포 배양을 유도하는 것이다. 또한 scale-up 하여 2L 교반식 생물반응기에서의 성장을 확인하고자 한다. 실험 결과 기존에 사용하던 무혈청 배지 이외에도 다른 무혈청 배지에 dextran sulfate 100 ㎎/ℓ을 첨가하면 응집이 해결되어 동등한 세포 성장을 유도 했을 뿐만 아니라, 높은 항체 생산성도 얻을 수 있었다. 또한 10계대 이상의 장기계대를 통해 장기 배양 가능성을 확인하였고 여러 첨가물을 통해 세포성장과 생산성의 증대를 확인 하였다. 이 결과를 이용하여 2L 교반식 생물반응기에서 배양 조건을 탐색한 결과 pH 6.9, 교반속도 60 rpm을 선별하였다. 선별한 조건 하에서 기존에 유일하게 성장하던 배지에서의 배양결과와 비교했을 때 최고세포농도 19.8 ×10^(5) cells/㎖(약 55% 이상의 세포성장), 항체 생산 236 ㎎/ℓ (약 78% 이상의 생산성증대)를 얻을 수 있었다. 또한 교반식 생물반응기에 나타난 전단응력의 문제를 해결하기위해 Pluronic F-68을 추가적으로 첨가한 결과 최고세포농도 27.8 ×10^(5) cells/㎖ 을 얻을 수 있었다.; In case of CHO-DG44 cells in this study, they are cultured only in specific commercial protein-free medium. Cell aggregation occurred in other commercial protein mediums. So in this study, we induced cell growth using dextran sulfate, that repress cell aggregation, making culture possible in other commercial protein mediums. Also we confirmed the growth at a 2L stirred tank reactor. As a result, we cultured other commercial protein-free medium adding 100mg/L of dextran sulfate. In addition to high cell density, it showed higher antibody titer production and stability in long term culture over 10 passages. Adding supplements in the improving medium also increased the cell growth and the antibody titer. Lastly, we cultured CHO-DG44 in the improving medium at a 2L stirred tank reactor. As a result, we sorted culture conditions at pH 6.9, rpm 60. We also achieved improvement in cell growth 19.8×10^(5) cells/㎖ (over 55%) and in antibody titer 236 ㎎/ℓ (over 78%). In addition to solve the shear stress problems in the stirred tank reactor, we inputed additional pluronic F-68 to achieve improveved cell growth 27.8×10^(5) cells/㎖