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F(ab)’2 항체 절편화 공정개발과 항원 결정기 진단으로의 응용

Title
F(ab)’2 항체 절편화 공정개발과 항원 결정기 진단으로의 응용
Other Titles
Development of antibody fragmentation process into F(ab)’2 and its application to epitope diagnostics
Author
노윤경
Alternative Author(s)
Noh, Yun Kyoung
Advisor(s)
주재범
Issue Date
2010-02
Publisher
한양대학교
Degree
Master
Abstract
항원-항체 결합 반응 시 nonspecific binding을 줄일 수 있고 면역성을 줄일 수 있고 Fc에 의한 effector 기능을 피하기 위해 항체분자 전체 보다는 F(ab)’2를 이용하고 있다. 본 연구에서는 FabRICATOR?瑛? 이용하였다. IdeS 또는 Streptococcal Mac-1 이란 명칭을 가지고 있는 FabRICATOR?瑛? Streptococcus pyogenes 사람 병원균으로부터 얻어졌다. 다른 절단 효소(예: pepsin, papain)와는 다르게 IgG의 heavy chain의 hinge 아래 부분을 특이적으로 절단하는 cysteine proteinase이다. 단클론항체(anti-HBsAg)과 다클론 항체(rabbit IgG) 모두 같은 패턴으로 절단되었다. 또한 poly histidine tag를 가지고 있는 FabRICATOR가 nickel bead와 그리고 Fc가 Protein A와 효과적으로 결합하여 F(ab)'2 및 Fc와 FabRICATOR 효소를 효율적으로 분리할 수 있었다. FabRICATOR은 nickel bead에 부착된 상태에서 3회 까지는 재사용이 가능하였다. 얻어진 F(ab)’2의 HBsAg와의 결합 친화력을 전체항체인 anti-HBsAg와 비교하기 위하여 SPR 분석을 수행하였다. SPR biosensor를 통하여 anti-rHBsAg F(ab)’2와 anti-HBsAg의 HBsAg 결합반응의 Kd이 각각 3.83 x 10-12 M과 4.61 x 10-12 M으로 확인되어 F(ab)'2의 결합친화력이 전체항체 분자의 결합력과 거의 동일한 것으로 나타났다. 표면이 carboxyl기로 코팅된 자성입자에 anti-rHBsAg F(ab)’2와 anti-rHBsAg를 고정 시킨 후 HBsAg와의 결합력을 확인한 결과 각각 4.32 nM과 4.24 nM으로 확인되어 자성입자에 고정화된 anti-rHBsAg F(ab)’2 의 결합력이 anti-HBsAg의 결합친화력과 동일한 것으로 나타났다.
URI
http://dcollection.hanyang.ac.kr/jsp/common/DcLoOrgPer.jsp?sItemId=000000057693https://repository.hanyang.ac.kr/handle/20.500.11754/142593
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GRADUATE SCHOOL[S](대학원) > BIONANOTECHNOLOGY(바이오나노학과) > Theses (Master)
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