Chinese Hamster Ovary(CHO) 세포 배양용 신규 화학 조성 지질 혼합물의 개발 및 평가

Abstract

동물 유래 성분인 대구 간유 (Cod liver oil)가 포함된 지질 혼합물은 recombinant Chinese Hamster Ovary-DG44 (rCHO-DG44) 세포 배양을 위한 배지 첨가물로써 사용되고 있다. 이 대구 간유를 구성하고 있는 성분은 명확히 규명되어있지 않은 복합 물질이기 때문에, 화학적으로 규명된 물질로만 이루어진 화학 조성 배지 제작 시 첨가물로서의 사용이 제한적이다. 그러한 이유로 조성이 알려져 있는 상용 화학 조성 지질 혼합물을 첨가하여 평가를 하였지만, 대구 간유가 포함된 지질 첨가물을 첨가한 경우에 비해 세포 성장은 약 70%, 항체 생산은 약 50%으로 대체 사용에는 무리가 따른다고 판단했다. 따라서 본 연구에서는 화학적으로 정의된 성분들로 이루어진 지용성 혼합 첨가물의 제조를 위하여 지질 혼합물의 주요 구성 성분인 cholesterol, tocopherol, vitamin A, vitamin D, 지방산 2종 등에 대하여 세포 성장 및 항체 생산에 대한 영향을 평가하였다. 지용성 성분이 배제된 자체 화학 조성 배지 (HY-CDM)에서 지방산 성분으로 linoleic acid와 lipoic acid 만을 강화하여 사용할 경우 복합 지질 혼합물을 사용한 조건에 비하여 세포 성장 비교 시 약 60%정도의 성능을 나타내었다. 또한 linoleic acid와 lipoic acid가 첨가된 조건에서 tocopherol 보강 시 세포성장은 복합 지질 혼합물을 사용한 조건에 비하여 약 65%를 증가시켰고, cholesterol과 tocopherol의 동시에 사용한 경우는 항체 생산에 있어 약 10% 향상 시키는 효능을 보였다. Linoleic acid, lipoic acid, cholesterol과 tocopherol로 이루어진 지용성 혼합물에 대구 간유의 주요 구성 성분인 vitamin A와 vitamin D를 첨가한 경우 세포 농도 및 항체 생산은 복합 지질 혼합물을 사용한 조건 대비 약 15% 이상 향상 시키는 결과를 얻을 수 있었다. 제작된 지질 혼합물은 7 가지 이상의 fatty acid로 이루어진 상용 화학 조성 지질 첨가물과 비교하여 20% 이상 향상된 성능을 나타내지만 대구 간유가 포함된 복합 지질 첨가물에 대비하여 75%의 성능을 보이므로 대구 간유 대체를 위해서는 본 연구에서 평가되지 못한 대구 간유 구성 성분들에 대한 지속적인 연구가 필요할 것으로 판단된다.