무단백 배지의 배지 조성물이 Vero 세포 현탁 배양에서 세포응집에 미치는 영향

Abstract

Vero 세포는 아프리카 초록원숭이의 신장세포로부터 유래된 세포로 광견병 백신, 소아마비 백신, 일본뇌염 백신 등 광범위한 바이러스 백신 생산에 주로 사용되었다. Vero 세포주는 30년이 넘는 기간 동안 사람 백신생산에 성공적으로 사용되었으며, WHO가 선정한 인플루엔자 백신용 세포주 중 유일하게 안전성이 증명된 세포주이다. 효과적인 바이러스 백신생산을 위해서는 백신의 대량 생산이 요구되므로 Vero 세포의 대량 배양 또한 필수적이다. Vero 세포는 배양기 표면에 고착하여 성장하는 anchorage-dependent 세포로서 세포의 대량 배양은 배양기 표면적에 의해 제한을 받는다. 따라서 Vero 세포와 같은 anchorage-dependent 세포의 고농도 배양은 microcarrier에 세포를 고착시켜 bioreactor에서 배양하는 microcarrier culture가 이용되나 이는 교반 시 세포에 충격을 줄 수 있는 위험이 있고 microcarrier의 높은 비용 또한 단점으로 지적된다. Vero 세포의 현탁 배양 공정 개발은 현재 보고되지 않았다. 이에 따라 본 연구에서는 Vero 세포의 대량 배양을 위해서 Vero 세포의 현탁 배양을 목적으로 하였다. 자체 제작 배지 Medium A에서 Vero 세포의 계대를 진행해 본 결과, 세포의 응집으로 인하여 세포는 높은 사망률을 보였으며 이로 인해서 장기적인 계대 배양이 어려웠다. 세포의 응집을 막기 위한 Vero 세포 배양용 배지 Medium A의 최적화를 위하여 배지의 성분 중 세포의 생존과 성장에 필수적으로 알려진 amino acids, vitamins 등 배지성분들을 평가하여 Vero 세포 응집에 영향을 미치는 물질을 선별하였다. 실험결과 과량의 Hydrolysate는 세포의 응집을 유발하는 것을 알아냈으며 dextran sulfate 첨가 시 세포응집을 억제하며 장기 계대가 가능한 것을 확인하였다. Medium A와 희석한 Medium A의 비교로 인하여 단순한 한 특정 물질이 아닌 다양한 배지 조성물들의 동반 효과로 Vero 세포의 응집을 억제한다는 결과를 보였다.