방기(防己) 알칼로이드 성분의 골격근 세포 위축 개선

Abstract

골격근 감소를 완화시킬 수 있는 천연물 유래 성분을 탐색하기 위하여 dexamethasone으로 골격근세포 위축을 유도한 후 추출물의 활성을 평가하였다. 마우스 근원세포주인 C2C12를 단핵의 근원세포 (myoblast)에서 다핵의 근관세포 (myotube)를 형성하도록 분화하여 dexamethasone과 함께 총 48가지의 천연물 추출물을 처리하여 효과를 탐색하였다. 그 중에서 방기 (Sinomenium acutum)추출물을 처리한 군에서 dexamethasone에 의한 C2C12 세포의 지름 (diameter) 감소를 효과적으로 예방하는 것을 확인하여, 그 활성 성분을 규명하고자 본 연구를 진행하였다. 방기의 활성 성분을 추적 분리 하기 위하여 50% ethanol으로 추출하였으며, n-butanol-acetonitrile-water (10:2:8, v/v, 0.5% trietylamine 첨가)의 조건에서centrifugal partition chromatography를 수행하여 17개의 분획을 얻었다. 각 분획물을 수득한 중량비로 처리하였을 때 6개의 분획에서 활성을 나타냈다. 이들 활성분획을 preparative HPLC로 단일성분을 분리, 정제하여 NMR과 ESI-mass를 통하여 구조를 동정하였다. 활성분획에서 magnoflorine (1), sinomenine (2), liriodentrin (3), N-feruloyltyramine (4), acutumine (5), dauricumine (6), syringin (7)를 확인하였으며, 화합물 1-7을 0.1과 1 nM을 dexamethasone 유도 골격근 감소 C2C12 세포에 처리하였을 때 화합물 1, 2, 5에서 골격근세포 두께의 감소를 개선하는 효능을 확인하였다. 또한 활성 지향적 추출법을 확인하기 위하여 용매의 조성을 바꾸어 추출실험을 진행한 결과 75% ethanol에 0.5% acetic acid를 첨가한 용매의 추출물에서 근위축에 대한 개선효과가 가장 좋았으며, 이때 추출물 1 g당 화합물 1, 2, 5의 함량은 각각 35.56, 32.94, 10.21 mg 이었다.