CD7 특이적인 단일 체인 항체를 이용한 T 세포 표적 지향적 siRNA 전달

Abstract

표적 지향적 siRNA 전달 방식은 사람의 T 세포를 통해 감염되 는 HIV의 치료에 적용될 수 있을 것이다. 우리는 사람의 T 세포의 대 부분에서 발현되며, 항체가 결합할 경우 빠르게 세포 내로 이동하는 CD7에 결합할 수 있는 단일 체인 항체(scFv)를 표적물질로 선정하였다. CD7에 scFv가 결합하면 수용체 매개를 통해 일어나는 endocytosis에 의 해 급속하게 세포 내부로 이동한다. 우리가 만든 scFv에는 그 C 말단부 위에 thiol 그룹을 가지고 있기 때문에 우리는 그 뒤에 Npys를 함유하고 있는 9개의 arginine으로 이뤄진 펩타이드를 화학적 방법을 이용하여 결 합시켰다. 이렇게 만들어진 CD7-9R은 siRNA 전달체로서의 역할을 하였 다. 우리는 CD4를 목표 유전자로 하는 siRNA (siCD4)를 우리가 만든 전 달체와 결합시킨 뒤, CD7을 세포 표면에 발현하는 세포주인 Jurkat에 투 여하였다. 그 결과 siRNA가 효과적으로 Jurkat세포 내부로 전달되었으며, CD4의 유전자 발현을 효과적으로 억제하였다. 두 번째로, 우리는 이 전달체와 siRNA의 결합체를 프라이머리 휴먼 T cell에 투여하였고 Jurkat세 포와 마찬가지로 T cell로만 siRNA를 전달하였고 효과적으로 유전자 발 현을 억제하였다. 이 결과들로부터 우리는 앞으로 치료를 목적으로 하 는 siRNA와 우리의 전달체를 결합시킬 경우 바이러스가 감염된 사람의 T cell을 대상으로 하는 치료제로서 가능성을 갖고 있다고 판단된다.; Targeted delivery of synthetic small interfering RNA (siRNA) has the potential to inhibit HIV infection in human T cells. We identified an internalizing single chain [single chain variable fragment (scFv)] antibody that target CD7 molecules, which is present on a major subset of human T cells. The binding of anti CD7 scFv induces rapid internalization into the cells by receptor mediated endocytosis. We chemically conjugated Cys(Npys)-nona-D arginine peptide (9R) as a siRNA delivery vehicle to a purified to a single chain antibody to CD7 at its C-terminal end. First, we combined the FITC conjugated siRNA and siRNA targeting CD4 (siCD4) with our siRNA delivery vehicle and tested to Jurkat, which is the CD7-positive cell line derived from T lineage acute lymphoblastic leukemias. The noncovalent complexation of a synthetic siRNA with scFvCD7-9R could deliver siRNA into Jurkat effectively and induced gene silencing. Second, we tested this scFvCD7-9R to primary human T cells in vitro, which resulted in successful delivery of siRNA into human T cells and effective gene silencing of target genes. These results showed the possibility that our siRNA vehicle could be used as a potential carrier of siRNA to the human T cells for the treatment of viral infection.