Microarray형 휴대성 면역진단칩 개발

Abstract

최근 체외진단을 위해 항원-항체 반응을 이용한 다양한 진단 칩이 상품화 되고 있다. 본 연구는 B형 간염(HBV-hepatitis B virus)을 쉽고 빠르게 진단할 수 있는 microarray 형 진단 칩 개발을 목적으로, 알데하이드기로 코팅된 유리 지지체 위에 HBsAg 및 anti-HBsAg를 reductive amination에 의한 공유결합으로 고정화 시킨 후, 고정화된 리간드 밀도에 따른 신호변화 및 동결건조 후에도 반응성이 유지됨을 효소면역측정법(Enzyme linked immuno sorbent assay)을 통해 확인하였다. 물리적 흡착에 의해 리간드 단백질을 고정화 시킬 경우 세척에 의해 쉽게 유실됨을 확인, 유리지지체를 이용한 microarray 형 진단 칩 개발을 위해서 리간드 물질의 공유결합이 필수적임을 확인하였다. 또한 QCM(Quartz crystal microbalance)를 이용하여 gold chip 표면에 공유결합으로 고정화된 리간드 항원 및 항체가 동결건조 후 반응성이 유지됨을 항원-항체 결합반응을 이용한 확인하였다. 이를 통해 자체적으로 제작한 웰칩 (well-on-chip)에 HBsAg와 anti-HBsAg를 공유결합 방법으로 고정화 후 동결건조를 시킨 후, HBsAg와 반응을 통해 생성된 형광이미지 강도를 분석해 B형 간염 감염 여부를 빠르고 쉽게 진단할 수 있는 진단 칩의 타당성을 제시하였다.; We tried to develop a portable microarray-type immunodiagnostics chips as fast and easily detecting hepatitis B virus. The ligand protein (HBsAg and anti-HBsAg) was immobilized on a aldehyde modified glass surface by reductive amination. After freeze-drying, we confirmed that reactivity of ligand protein was maintain by using ELISA (Enzyme linked immuno sorbent assay) method. And we also confirmed that physical adsorption ligand protein was washed out by washing step. Therefore, covalent conjugation method of ligand protein was essential to use glass surface. we confirmed that conjugated ligand protein maintained reactivity after freeze-drying step by using QCM (Quartz crystal microbalance) and analysis of fluorescent signal density. Finally we manufactured our well-on-chip and applied upper trial to develop a portable microarray-type immunodiagnostics chips as fast and easily detecting hepatitis B virus. In this experiment, we represented appropriate basis of new immunodiagnostis chips.