High Performance Liquid Chromatography를 이용한 human plasma에서의 sulindac의 분석방법개발과 생체이용률시험

Abstract

Sulindac은 그자체로는 약리작용이 거의 없으며 체내에서 대사된 sulfide 대사물이 cyclooxygenase를 억제하는 작용이 강하다. 경구투여시 약 90%가 흡수되며, 부작용으로는 주로 위장관계와 중추신경계의 부작용이 나타나고 가끔 피부발진과 가려움증도 일어난다. 류마티스 관절염, 골 관절염 및 강직 척추염 등에 주로 사용된다. Sulindac 정을 대상약으로 생물학적동등성시험을 수행하기 위한 혈장시료처리방법, 및 High-performance liquid chromatography (HPLC) 분석방법을 확립하였고, 생물학적동등성시험 기준 (식약청고시 제2002-60호, 2002.11.22)에 따라서 건강한 성인 9명을 선정하여 설린닥(sulindac, 200 mg 정, 건일제약 <크리돌정>)을 경구-투여하고 24시간 채혈하여, 혈장 내 sulindac 농도를 정량한 후, sulindac (200 mg)정의 AUC, Cmax, tmax, Ke, 및 t1/2β 등 약동학적 지표들을 다음과 같이 산출하였다. 1. ODC-역상 HPLC column (5 um, 4.6 mm×150 mm)을 사 용하는 단상-역상 HPLC 방법으로 혈장 sulindac 농도를 정 량분석하는 혈장시료처리방법 및 HPLC 분석조건들을 확립 하였다. 피험자로부터 각 시간별로 채취하여 - 20℃에 보관했 던 혈장시료를 실온에 방치하여 녹인 후 진탕한 다음 이 혈 장 250 ㎕을 취하여 시험관에 옮긴다. 여기에 0.1 N HCl 100 ㎕를 넣은 후 voltex로 혼합한 다음 내부표준물질인 ketoprofen (5 ㎍/㎖) 100 ㎕를 첨가하고, 다시 voltex로 혼 합하고, 12.000 rpm에서 5 분간 20℃ 원심 분리하여 상등액 을 0.4 ml 취해 SPE-C18 Cartridge (100 mg: 약 17 - 18 % 의 carbon-loading)에 옮긴다. 시료를 완전히 배출시킨 후 에 SPE cartridge를 10% 메탄올의 25 mM 인산완충액 1.2 ml로 세척하고 0.5 ml ethylacetate로 sulindac과 내부표준 물질인 ketoprofen을 용출시켰다. 용출액을 45℃ thermal block과 질소 기류 하에서 건조시킨 후에 이동상인 acetonitrile과 pH 5.0의 50 mM potassium dihydrogen phosphate(36:64, v/v)혼합용액 500 ul를 첨가하여 잔사 를 녹였다. 완전히 용해된 sample을 다시 12.000 rpm, 5 min, 20℃에서 원심 분리시켜 그 상층액을 micro- nylon sylinge filter(pore size : 0.2 ㎛)로 여과한 후 시료용 액 20 ㎕를 HPLC-injector에 주사하여 HPLC 상에서 분리-정 량하였다. 분석기기 조건은 펌프는 Waters 515 pump을, 검 출기로는 Waters UV detector : 256 nm를, 컬럼은 ODC-역 상 HPLC column (CAPCELL-PAK(shiseido) 5 um, 4.6 mm×150 mm)을, 데이터 처리장치로는 ds CHROM data module의 Integrator를 사용하였다. 이동상으로는 acetonitrile과 pH 5.0 의 50 mM potassium dihydrogen phosphate(36:64, v/v)혼합용액을 사용하고 유속 1.0 mL/min에서 정량 하였다. 2. 검출한계는 0.1 ug/ml 이며 0.1 ug/ml - 10 ug/ml 범위에 서 양호한 직선성 (r2 = 0.998)을 나타내었다. 3. Sulindac (200 mg 정, 건일제약 <크리돌정>)의 각 약동학 적 지표들은 AUC: 4.918 ug/ml&#12539; hr, Cmax: 2.659 ug/ml, tmax: 1.349 hr, Ke: 0.087 hr- 및 t1/2β: 1.946 hrs 등으로 산출하였다.; The present study is to determine of sensitive sulindac analysis method using HPLC and measure the pharmacokinetics parameters (bioavailability, Cmax, Tmax, Ke, T1/2) of sulindac (200 mg, Tab; Keonil Pharmaceutical Co, Ltd). Plasma (250 ul) was mixed with ketoprofen (internal standard, 5 ug/ml). Detection wavelength was 256 nm. The mixture of 50 mM potassium dihydrogen phosphate and acetonitrile 64:36 (v/v) was used mobile phase. The HPLC separation was accomplished on ODC reverse HPLC column. The sulindac was analyzed by a HPLC system, which consists of CAPCELL PAK C18 column (5 ㎛, 4.6 × 150 mm) and a chromatography data analysis S/W, using a isocratic mobile phase (mixture of 50 mM potassium dihydrogen phosphate and acetonitrile 64:36 <v/v>) at 1.0 ml/min. Its sensitivity, selectivity, accuracy and precision must be adequate for the bioequivalence study of sulindac and the linearity (r2 ≥ 0.998) of sulindac was also proved in the range of 0.1 ug/ml ― 10 ug/ml. The pharmacokinetic parameters of sulindac (200 mg) tablets were measured as the follow. AUC: 4.918 ug/ml&#12539; hr, Cmax: 2.659 ug/ml, tmax: 1.349 hr, Ke: 0.087 hr-, t1/2β: 1.946 hrs