담낭암 세포주에서 HGF에 의한 Cyclooxygenase-2 (COX-2)의 발현

Abstract

국문요지

배경/목적: 담낭암은 여러가지 담도계 질환이 담낭암의 발생과 연관되어 있기 때문에 담낭암 발생에 유전적인 요소와 환경적인 요소가 관여할 것이라고 추정되나, 담낭암 발생경로는 아직 명확하게 규명되어 있지 않다. 담낭암의 발생은 만성염증과 관계가 있으므로 COX-2가 관여할 수 있으며, COX-2는 염증반응과 발암과정에 관여하고 있다. 담낭암에서 COX-2는 기존에 확인된 c-erbB-2 경로뿐 만 아니라 HGF/c-Met 경로의 자극에 의해서도 조절될 것이라는 가설을 세우고, 세포이동, 세포증식 및 형태형성에 영향을 주는 간세포성장인자(Hepatocyte growth factor; HGF)에 의한 c-Met과 COX-2의 발현을 확인하고자 하였다. 이에 본 연구에서는 담낭암세포를 이용하여 HGF에 의한 COX-2의 발현과 어떠한 신호전달경로를 통해 COX-2가 작용하는지를 알아보고, COX-2 억제제(inhibitor)를 사용하여 HGF/c-Met 경로에 의해 COX-2가 억제 되는지를 알아보았다. 방법: 정상, 담낭결석, 만성담낭염, 담도암 담낭조직을 대상으로 HGF, c-Met, COX-2 면역염색을 시행하였고, 담낭암 세포주인 GB-d1 세포에 HGF (10 ng/ml)를 처리 후 0, 6, 12, 24, 48시간별로 c-Met, COX-2 단백질 발현량을 측정하기 위하여 western blot을 시행하였다. 또한, HGF에 의해 COX-2의 발현이 상향조절 되는지를 알아보기 위해 COX-2 억제제인 NS-398과 항암 및 세포자멸사(apoptosis) 유도작용을 하는 후코이단(fucoidan)을 전처리 후 발현량을 확인하기 위해 western blot을 시행하였다. 결과: 면역염색결과 담낭암 조직의 약 50%에서 COX-2 발현이 증가하였고, HGF/c-Met도 세포질에서 발현이 증가하였다. Western blot 결과 HGF에 의해 유도되는 c-Met과 COX-2 단백질은 시간 비례적으로 발현량이 증가하였고, COX-2 억제제인 NS-398을 전처리 후 c-Met 단백질 발현량은 큰 차이가 없었으나, COX-2 단백질은 HGF 자극군에 비해 용량 효과적으로 발현이 감소되었다. 후코이단도 c-Met 단백질의 발현정도에는 영향이 없었으나 COX-2 단백질은 후코이단의 농도 비례적으로 발현이 감소하였다. 결론: 담낭암 조직에서 HGF, c-Met, COX-2의 발현증가가 관찰되었고, HGF는 담낭암세포에서 c-Met, COX-2 단백질의 발현을 증가시키고, COX-2는 COX-2 억제제인 NS-398과 후코이단에 의하여 조절되는 것으로 보아, HGF/c-Met에 의한 COX-2의 발현조절이 주변분비 조절 또는 자가분비 조절에 의하여 담낭암의 발생에 관여할 것으로 추측된다.