화학조성배지에서 재조합 CHO-DG44 세포 배양시 고갈되는 성분 선별

Abstract

본 연구에서는 CHO-DG44 host cell과 동일한 세포를 이용하여 만든 recombinant CHO-DG44 (rCHO-DG44) 1, 2번 cell line을 이용하여 In house chemically Define Media (HY-CDM) 배지에 배양 시, 배양 중 고갈되는 성분들을 선별하였다. 그리고 선별된 성분들을 보강하였을 때 세포 성장과 항체 생산량을 관찰하였다. 세포 배양 시 배양 5∼6일 이후 세포 성장이 지속적으로 유지되지 못하고 사멸기에 들어서게 되는 것을 볼 수 있다. 이와 같은 결과는 배양 중 배지 내에 세포 성장에 도움을 주는 특정 성분의 고갈로 인한 것이라고 판단하였다. 따라서 세포 성장이 둔화되는 4일과 세포가 사멸하기 시작하는 7일의 supernatant을 이용하여 배지 내에 고갈되는 성분을 확인하는 실험을 진행하였다. rCHO-DG44 1, 2번 cell을 HY-CDM에 배양 시, 배지 내 여러 성분들 중 아미노산과 small molecules group의 고갈이 크게 발생되는 것을 확인할 수 있었다. 고갈된 두 group을 중 small molecules의 경우 앞선 실험과 같은 방법인 supernatant를 이용하여 분석하였고, 아미노산의 경우 HPLC 분석을 통하여 고갈된 성분을 선별하여 보충하였다. 그 결과 고갈된 성분들을 개별적으로 강화 시에는 세포성장 및 항체 생산에 큰 차이를 보이지 않았으나, 함께 강화 시 항체 생산 면에서는 큰 차이를 보이지 않았지만 세포성장면에 있어서 적게는 30%에서 많게는 100%정도의 세포성장이 증가하는 것을 확인하였다. 이와 같은 방법을 통해 선별된 성분들은 세포 batch culture와 fed batch culture를 위한 feed media로써 활용 가능 할 것으로 예상된다